真(zhen)(zhen)(zhen)菌(jun)(jun)毒(du)素(su)(su)是(shi)真(zhen)(zhen)(zhen)菌(jun)(jun)在適(shi)宜條件下產生(sheng)的有(you)(you)毒(du)次級代謝產物(wu)，能夠引發人類、動物(wu)各種急、慢性疾病。我國(guo)高度重視真(zhen)(zhen)(zhen)菌(jun)(jun)毒(du)素(su)(su)污染(ran)問題，GB 2761-2017 食(shi)品安全國(guo)家標準 食(shi)品中真(zhen)(zhen)(zhen)菌(jun)(jun)毒(du)素(su)(su)* 規定了食(shi)品中黃(huang)曲(qu)(qu)meidu素(su)(su)B1、黃(huang)曲(qu)(qu)meidu素(su)(su)M1、脫(tuo)氧雪腐(fu)鐮(lian)刀菌(jun)(jun)烯醇、展青霉素(su)(su)、赭曲(qu)(qu)霉毒(du)素(su)(su)A及玉米赤霉烯酮的*。據報道我國(guo)每年(nian)有(you)(you)3100萬噸糧食(shi)在生(sheng)產、儲存、運輸過程中被真(zhen)(zhen)(zhen)菌(jun)(jun)污染(ran)，約占(zhan)糧食(shi)年(nian)總產量的6.2%。為(wei)了保證我國(guo)糧食(shi)質量安全，避免不必要的經濟損失，及時快速監(jian)測真(zhen)(zhen)(zhen)菌(jun)(jun)毒(du)素(su)(su)污染(ran)種類、水平及其(qi)風險尤(you)為(wei)重要。
由(you)于真(zhen)菌(jun)毒(du)素(su)種類多(duo)樣，且存(cun)在協同污(wu)(wu)染，為確(que)保全面(mian)、快(kuai)速(su)的(de)(de)了解(jie)糧食中(zhong)(zhong)真(zhen)菌(jun)毒(du)素(su)的(de)(de)污(wu)(wu)染情(qing)況，迫切(qie)需要一種簡單(dan)、快(kuai)速(su)、靈敏、同時準確(que)測定糧食中(zhong)(zhong)多(duo)種真(zhen)菌(jun)毒(du)素(su)的(de)(de)方(fang)法。目前真(zhen)菌(jun)毒(du)素(su)的(de)(de)前處理檢測方(fang)法主要有酶聯免疫(yi)吸附法、免疫(yi)親和柱方(fang)法等(deng)。
基于抗原抗體相互作(zuo)用的酶聯(lian)免疫吸附法雖有(you)較(jiao)高的選(xuan)擇性，但無法準確定量，同(tong)時由于前(qian)處理簡(jian)單，沒有(you)有(you)效(xiao)(xiao)的凈化，易受基質干擾(rao)，產生假陽性。免疫親和柱前(qian)處理凈化方(fang)(fang)法由于其特(te)異性吸附，凈化效(xiao)(xiao)果好(hao)，但是一方(fang)(fang)面操(cao)作(zuo)復(fu)雜(za)，另外一方(fang)(fang)面成本較(jiao)高，不適合(he)大(da)規模檢測。
給大家分享使用(yong)QuEChERS作為前處理(li)凈化(hua)的方法，操作簡單，重復性(xing)好，回收率高。采用(yong)Accucore aQ HPLC 色譜(pu)柱分離，表面(mian)多孔(kong)增強核技術的運用(yong),兼(jian)容100%水相，同時增強了對極性(xing)化(hua)合(he)物的保(bao)留及選擇(ze)性(xing)。采用(yong)LC-MS/MS方法，15min內(nei)快速完成低濃(nong)度真(zhen)菌毒素(su)的分析(xi)，該(gai)方法適合(he)于糧谷中多種真(zhen)菌毒素(su)的分析(xi)檢測。
樣品前處理
1
樣品提取
1
稱取5g均質后(hou)的樣品放(fang)入50mL離心管中，加(jia)入10 mL 水，震搖(yao)15 min
2
再加入10mL 2%甲酸乙(yi)腈，旋(xuan)渦混合1min
3
加入(ru)HyperSep萃取鹽包(bao)(P/N 60105-332-B：4g MgSO?,1g NaCl) ，快速震搖1min.
4
≥3000g 離(li)心5min
2
樣品凈化
1
移取1mL上清液到HyperSep凈(jing)化(hua)管(guan)(guan)中（P/N：60105-204-B：QuEChERS 2mL 離心管(guan)(guan) 帶150mg MgSO?, 50mg PSA 50mg C18 ），震搖30s， ≥3000g 離心5min
2
移(yi)取500μL凈化液，使用純水稀釋4倍，過0.2μm濾膜后上機檢測
色譜條件
色譜柱 | Accucore aQ, 100 × 2.1 mm, 2.6 μm(P/N 17326-102130) |
柱溫 | 35 ℃ |
進樣量 | 10 µL |
流動相 | A0.1%甲酸(suan)水B0.1% 甲酸(suan)乙(yi)腈 |
表1.梯度洗脫程序（點擊(ji)查看大圖(tu)）
質譜條件
離子源 | 電噴霧離子源 |
質譜掃描方式 | 多重反應(ying)監測模式（MRM） |
錐孔電壓 | 3.0kV |
加熱氣溫度 | 500℃ |
離子源溫度 | 150℃ |
脫溶劑氣 | 800L/H |
選擇反應監測離子對信息見下表 | |
表2.化合物(wu)及質譜采集參數(shu)（點擊查(cha)看(kan)大圖）
實驗結果
標準品及樣品加標譜圖
圖1.12種真菌毒素標準溶液圖譜(pu)（濃度(du)見表3）（點擊(ji)查看大圖）
圖2.玉(yu)米(mi)中12種真菌毒(du)素(su)加(jia)標(biao)圖譜（加(jia)標(biao)濃(nong)度見表3）（點擊查看大圖）
采(cai)用上述分析方法，12 種(zhong)真(zhen)(zhen)菌(jun)毒素(su)在(zai)15 min內均(jun)可獲得良(liang)好的(de)色譜峰，圖1為 12種(zhong)真(zhen)(zhen)菌(jun)毒素(su)標(biao)準(zhun)溶液(ye)圖譜（濃度見(jian)表3），各(ge)化合(he)物靈敏度測試結果見(jian)表3，LOD在(zai)0.1-2ug/kg之(zhi)間(jian)。12 種(zhong)真(zhen)(zhen)菌(jun)毒素(su)相(xiang)對標(biao)準(zhun)偏差(cha)RSD% 均(jun)小于15%（見(jian)表3）
表3.12種真菌毒素回(hui)收率數據(ju)及(ji)LOD（點擊(ji)查看大圖）
結論
開(kai)發了一種快(kuai)速簡(jian)單的(de)QuEChERS前處理方(fang)法用(yong)(yong)于糧(liang)谷中12種典型真菌(jun)毒素(su)的(de)分析，使用(yong)(yong)Accucure aQ表面多孔(kong)增強核色(se)譜柱，增強了對極性化(hua)合物(wu)的(de)保(bao)留及(ji)選擇性，峰形良好。采用(yong)(yong)LC-MS/MS方(fang)法，15min內快(kuai)速完成低濃度真菌(jun)毒素(su)的(de)分析，并獲得較好的(de)回收率(lv)，回收率(lv)范圍(wei)60-110%，LOD為(wei)0.1-2 ug/kg，該(gai)方(fang)法適合于糧(liang)谷中多種真菌(jun)毒素(su)的(de)分析。
